
2024年9月由上海农林大家张万刚院士团队图片在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章,研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低(P < 0.05),并表现出剂量依赖性的抑制作用,其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化,进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱微生物为该研究提供了亚硝基化体现组学拜谱生物,助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。
中文名字名称:体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响
杂志:Journal of Agricultural and Food Chemistry
202四年影晌细胞因子:5.7
发布日子:2024年9月
客服企业单位:南京农业大学
探索原料:蛋白
拜谱作为技术水平:亚硝基化修饰组学
技术设备途径:
一、理论研究结局
01.Caspase-3活力
到目前为止尚不模糊不清NO对caspase-3的缓和功能是否需要归因于NO介导的S-亚硝基化,其他密度系数的GSNO用作外源性NO提供,以引诱caspase-3的离体S-亚硝基化。后果表面,与不能GSNO的组不同之处,100、200和400μM GSNO组的caspase-3抗逆性正相关变低(图1),与之前宣传报道一样的。GSNO办理变低caspase-3抗逆性的不确定性愿意仍尚需阐发。
图1 其他渗透压的GSNO加工处理对caspase-3特异性的应响
02.Caspase-3的S-亚硝基化的情况
探讨Caspase-3的亚硝基化层面,以系统阐述GSNO对Caspase-3的想法性。经GSNO治理 后,的在线检测到caspase-3蛋清S-亚硝基化屈服强度增多(图2)。此类最终结果意味着,外源性GSNO激发可完美介导caspase-3的身体之外S-亚硝基化。让人觉得特别的是,在还没有GSNO现实存在的比组中的在线检测到的细小的S-亚硝基化带,这意味着caspase-3应该进行内源性的S-亚硝基化。除此以外,本探讨中caspase-3的S-亚硝基化层面较高,而caspase-3的特喜欢的人较低,这与在之前的探讨不同。但是,caspase-3的特喜欢的人S-亚硝基化遮盖位点尚不模糊不清,还要求进一大步的生命的进化。
图2 GSNO净化处理对caspase-3S-亚硝基化级别的影晌
03.Caspase-3的S-亚硝基化位点
通过亚硝基化淡化组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明,caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰(图3)。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中,分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶,其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化,说明Caspase-3易受亚硝基化修饰(图4)。此外,据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163,这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断,半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的,这可能影响蛋白降解,促进死后衰老。
图 3 caspase-3的队列。白色符号的队列数字代表S-亚硝基化肽,网红符号的C数字代表S-亚硝基化半胱氨酸
图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪
04.S-亚硝基化Caspase-3化学降解结蛋白酶
结核核球淀粉酶酶酶充当属于关键性的神经组织细胞骨架核核球淀粉酶酶酶,在保持肌神经组织细胞型式的型式完善性和缩水性角度起着关键性做用,探索S-亚硝基化caspase-3对结核核球淀粉酶酶酶化学挥发的皮肤敏各样兼备关键性真正意义。与Std(未用胱天核核球淀粉酶酶酶酶-3和GSNO孵育的一开始肌玻璃化学纤维核核球淀粉酶酶酶)组比较,0 μM GSNO组(肌原玻璃化学纤维和caspase-3的孵育,无GSNO)的完善结核核球淀粉酶酶酶分子量偏态有效降低,得出结论caspase-3对结核核球淀粉酶酶酶兼备意向的核核球淀粉酶酶酶油脂水解力。在GSNO孵育后,完善结核核球淀粉酶酶酶的分子量严重增长(P < 0.05)。最后,当GSNO质量浓度身高时,完善结核核球淀粉酶酶酶的分子量连续调整(P < 0.05)(图5)。这个会发现得出结论,SNO淡化的caspase-3以的水平依赖症的方法控制结核核球淀粉酶酶酶的化学挥发。
图5.S-亚硝基化caspase-3挥发结血清
05.S-亚硝基化Caspase- 3分解肌钙球蛋白-T
肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清设定承担责任肌肉群膨胀的细细的的必备肌原弹性氯纶材料蛋清。TnT的可可可溶解基本特征是监测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化环境下,caspase-3对TnT的可可可溶解问题如下图6如下图所示,与Std组(不包含caspase-3和GSNO的肌原弹性氯纶材料)比起来,caspase-3组中30 kDa TnT场面描写同质性多,表面caspase-3参于了TnT的可可可溶解,不仅,caspase-3与GSNO的孵育致使30 kDa TnT下跌。在100和200 μM GSNO组中没能监测到特别的一定的差异(P > 0.05),而当GSNO的密度符合400 μM 时,该场面描写同质性增多(P < 0.05)。以下发现了表面了SNO淡化的caspase-3对TnT可可可溶解的治理和改善角色。结蛋清和TnT是caspase-3的神经敏感底物,而GSNO加工处理降caspase-3的灵可溶性还可以致使肌原弹性氯纶材料蛋清可可可溶解层度降。与此同时以上,NO引发的S-亚硝基化还可以在淡化半胱氨酸残基来设定caspase-3的灵可溶性,而使进一点直接作用其对结蛋清和TnT的蛋清水解反应学习能力,然后直接作用羊肉品格。
图6. S-亚硝基化caspase- 3可降解肌钙核蛋白-T
二、总结
本科研目的在于浅析S-亚硝基化对caspase-3遮盖的作用试述接着对牛羊肉肌原玻纤身体之外降解塑料的作用。球球核蛋白S-亚硝基化会遮盖caspase-3的半胱氨酸残基,以此使得caspase-3吸附性减低,进步调控了其对牛羊肉肌原玻纤球球核蛋白的球球核蛋白油脂水解本事。三、拜谱总结
分析一下适用了酶活法测定,亚硝基化绘制组学分析一下,WB等判断具体方法,看到血清质S-亚硝基化可绘制caspase-3的半胱氨酸残基,这使得了caspase-3活性酶的削减,相结一大步限制了其对牛肉片肌原黏胶纤维血清质的血清质油脂水解技能。本分析一下为解释一下血清质质亚硝基化对吃起来的调节作用制度展示了一大个新的感觉。拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司,可提供完善成熟的血清酶质组学、突显血清酶质组学、分解组学、转录组学等多组学产品技术服务体系,整合多组学数据进行深入挖掘分析,全面解析机制机理等,助力高分文章发表。除此之外,拜谱生物还可提供半胱氨酸新产品系列新产品,包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺硝化作用、total氧化反应恢复原、自由巯基,欢迎大家咨询!
参考选取期刊论文:
Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663